Pregunta 1. Realice los cálculos para determinar la cantidad de enzima LDH presente en una de sus reacciones. Obtenga la velocidad inicial (OD/seg) de su ensayo de volumen de 20 µl. Calcule cuántas unidades de LDH estaban presentes en esta reacción enzimática.
Velocidad inicial: 3,68E-03 OD/seg
Cálculo de las unidades de enzima LDH (U) en función de las mediciones de la velocidad inicial (OD/seg)
Aquí se muestra el proceso paso a paso que se utiliza para convertir su observación experimental (OD/seg) en una cantidad calculada (unidades de enzima, U):
1. En primer lugar, recuerde que U = μmol/min por definición (consulte la sección de introducción de este protocolo)
2. La tasa inicial se obtiene a partir de la pendiente (m) de la línea de tendencia: y = mx + b
Unidades de OD/seg
3. Convertir tiempo a minutos
[DO/seg]*( 60 seg/min) = DO/min
4. Convierta OD a unidades de concentración con la Ley de Beer: c = OD/(e*l)
e es el coeficiente de extinción para NADH (6220 cm-1M-1)
l es la longitud del recorrido de la cubeta = 1 cm,
c tiene unidades de concentración molar
5. En esta etapa, su valor tiene unidades = M/min (concentración/tiempo), pero usted quiere μmol/min
6. Convierta la concentración molar a μmol incluyendo el volumen en el cálculo. El volumen de la cubeta es 2,0 ml o 2 x 10-3 litros.
[M/min]*[2x10-3 l] = mol/min
(mol/min)*106 μmol/mol = respuesta final en μmol/min = U
Si pones todos estos pasos juntos en una ecuación, aquí está la forma de convertir OD/seg a U:
La ecuación anterior es válida únicamente para convertir de OD/s a unidades de enzima LDH con un volumen de ensayo de 2 ml y una cubeta de 1 cm de longitud de trayectoria. La ecuación se puede simplificar a:
El factor de conversión, 19,29, tiene unidades de (μmol/min)/(OD/seg).